酶聯(lián)免疫吸附劑測定法，簡稱酶聯(lián)免疫法，或者ELISA法。具體的操作步驟大致分為加樣本、溫育、洗板、加酶標物、溫育、洗板、加顯色劑、溫育、加終止液、比色讀數(shù)。當(dāng)然具體的檢驗步驟還是嚴格按照試劑說明書來操作。每一個小步驟出了問題都可能影響整個實驗的準確性。所以我們應(yīng)該注意每一個細節(jié)。細節(jié)決定成敗。下面咱們就來細說一下ELISA實驗中需要注意的問題。
一、標本
1、避免溶血；
2、盡量新鮮，避免細菌污染（一般5天內(nèi)測量的血清可在4℃條件下保存，否則低溫保存）。
二、試劑
1、使用前平衡至室溫；
2、配置洗板液應(yīng)該使用去離子水或者蒸餾水，保證水的新鮮。
三、設(shè)計實驗
1、設(shè)計好孔位，通常陰陽對照2個孔，空白對照1孔（必要時做好標注，避免錯誤）。
四、加樣
1、樣品應(yīng)全部加于反應(yīng)孔底部，避免液體懸掛在孔壁上，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡；
2、加樣量準確；
3、手工操作時加一下樣本時要及時更換吸嘴。
五、溫育
1、溫度、時間要嚴格控制；
2、最好使反應(yīng)杯盡快升高到所需溫度；
3、溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。
六、洗板
1、使用專用洗滌液，一般洗滌4-6次；
2、若手工洗滌，前兩次洗滌都不溢出反應(yīng)孔，防止污染，后面幾次洗滌都應(yīng)加滿反應(yīng)孔，這樣洗滌更干凈；
3、每次加洗滌液后應(yīng)浸泡30秒，再甩去洗液；
4、反應(yīng)板倒扣吸水紙上拍干。
七、顯色與比色
1、空白孔校零，讀取各孔OD值；
2、單波長or雙波長選擇：
a、單波長通常對顯色具有最大吸收的450nm或492nm；
b、雙波長則是在敏感波長450nm和非敏感波長630nm下各測一次。使用雙波長時不用設(shè)置空白孔，否則會造成孔吸光度為負數(shù)。
了解并有效地避開以上提到的實驗雷區(qū)，可以大大提高實驗的準確性，相信只要用心思考你就會成為最專業(yè)的檢驗師，山東博科酶免為您提供最周到細致的服務(wù)，為了人類的美好明天，我們一直在努力！
