咨詢熱線： 400-060-0285
動物細胞的培養(yǎng)可以使用純天然的培養(yǎng)基或人工/合成的培養(yǎng)基混合一些天然產(chǎn)物。
天然培養(yǎng)基
天然培養(yǎng)基僅由天然生成的生物液體組成。天然培養(yǎng)基非常有用和方便，適用于多種不同的動物細胞培養(yǎng)。但是，由于缺乏對這些天然培養(yǎng)基確切成分的認識，使用天然培養(yǎng)基的主要缺點是可重復(fù)性差。
人工培養(yǎng)基
通過人為地加入一些營養(yǎng)物質(zhì)（有機的和無機的）、維生素、鹽、O2和CO2氣體、血清蛋白、碳水化合物、輔因子，制備成人工或合成的培養(yǎng)基 。不同的人工培養(yǎng)基被分別設(shè)計用于下面的某個用途：
1）及時生存（平衡的鹽溶液，有特定的pH和滲透壓）
2）長時間生存（平衡鹽溶液輔以各種配方的有機化合物和/或血清）
3）不確定生長
4）特定功能。
培養(yǎng)基種類
用于細胞培養(yǎng)的各種各樣的人工培養(yǎng)基可以進一步分為以下四種類型：
1）含血清的培養(yǎng)基：胎牛血清是動物細胞培養(yǎng)基最常見的補充成分。它用來作為一種成本相對較低的補充成分，提供動物細胞培養(yǎng)最佳的培養(yǎng)基。這些補充劑能夠為不穩(wěn)定或不溶于水的營養(yǎng)物質(zhì)提供載體或螯合劑，提供激素和生長因子，蛋白酶抑制劑，并結(jié)合并中和有毒部分。
2）無血清培養(yǎng)基：培養(yǎng)基中含有血清存在有很多缺點，可能會成為免疫學(xué)研究中潛在的嚴重誤解的原因 。為了克服使用血清的這些缺點，一些無血清培養(yǎng)基中已經(jīng)開發(fā)出來了 。這些培養(yǎng)基通常是專門配制的，用以單一類型細胞的培養(yǎng)，包含確定量的純化的生長因子、脂蛋白和其它蛋白質(zhì)，而這些物質(zhì)本來是由血清提供的 。這些培養(yǎng)基也被稱為“確定的培養(yǎng)基”，因為這些培養(yǎng)基中的物質(zhì)是精確可知的。
3）確定化學(xué)成分的培養(yǎng)基：這些培養(yǎng)基包含無污染的超純無機和有機成分，也可能含有純蛋白質(zhì)添加劑，如生長因子 。這些成分通過基因工程細菌或酵母生產(chǎn)，添加維生素、膽固醇、特定氨基酸和脂肪酸 。
4）無蛋白質(zhì)培養(yǎng)基：無蛋白質(zhì)培養(yǎng)基不含有任何蛋白質(zhì)，僅包含用于細胞培養(yǎng)所必需的非蛋白成分。相比血清培養(yǎng)基，無蛋白培養(yǎng)基促進較好的細胞生長和蛋白表達，并有利于下游的表達產(chǎn)物純化 。
培養(yǎng)基的組成
培養(yǎng)基中混合有氨基酸、葡萄糖、鹽、維生素和其他營養(yǎng)物質(zhì)，供應(yīng)商可提供粉末或液體 。不同的細胞系對這些組分的要求有所不同，這些差別部分是由于大量的培養(yǎng)基配方 。每一成分擁有一個特定的功能，如下所述：
緩沖系統(tǒng)
pH值調(diào)節(jié)對維持最佳培養(yǎng)條件是至關(guān)重要的，通?？捎靡韵聝蓚€緩沖系統(tǒng)中的一個達到這一目的：
天然緩沖系統(tǒng)
天然的緩沖系統(tǒng)中的氣態(tài)CO2與培養(yǎng)基中的CO3/HCO3含量維持平衡。使用天然緩沖系統(tǒng)進行培養(yǎng)需要在5％至10％CO2環(huán)境下進行，通常由CO2培養(yǎng)箱維持。天然的緩沖系統(tǒng)一般成本低、無毒 。
HEPES
化學(xué)緩沖液利用兩性離子做緩沖。HEPES在pH值范圍7.2-7.4內(nèi)具有優(yōu)異的緩沖能力，并且不需要受控的氣體環(huán)境 。HEPES是相對昂貴的，并且在高濃度時對于某些類型的細胞是有毒的。HEPES受到熒光照射的光敏效應(yīng)誘導(dǎo)后大大提高了對培養(yǎng)基的敏感性 。
酚紅
大多數(shù)市售的培養(yǎng)基含有酚紅作為pH指示劑，它能夠持續(xù)監(jiān)測pH值 。在細胞的生長過程中，由細胞釋放代謝物造成的pH值改變會導(dǎo)致培養(yǎng)基的顏色變化。在低pH值時，酚紅使培養(yǎng)基變成黃，而在較高的pH值水平時，使培養(yǎng)基變成紫色。介質(zhì)在pH值7.4應(yīng)該是亮紅色，最適合細胞培養(yǎng)工作。但是，使用酚紅也有一定的缺點，如下所述：
酚紅可以模仿一些類固醇激素，特別是雌激素的作用。因此，在用到雌激素敏感的細胞，如乳腺組織做研究的時候，最好是使用不含酚紅的培養(yǎng)基。
一些無血清的配方中存在酚紅會干擾鈉-鉀平衡。這種效應(yīng)可以通過在培養(yǎng)基中加入血清或牛垂體激素中和。
酚紅會干擾流式細胞分析時候的檢測。
無機鹽
培養(yǎng)基中的無機鹽有助于保持細胞的滲透平衡，通過提供鈉、鉀和鈣離子調(diào)節(jié)膜電位.
氨基酸
由于氨基酸是蛋白質(zhì)的組成部分，它們是所有已知細胞培養(yǎng)基的必需成分。培養(yǎng)基中必須包含必需氨基酸，因為細胞不能自身合成。這些是細胞增殖必需的，其濃度決定了可達到的最大細胞密度。L-谷氨酰胺，作為一種必需氨基酸，在細胞培養(yǎng)是及其重要的。L-谷氨酰胺提供NAD，NADPH和核苷酸合成的氮元素，并作為新陳代謝的二次能量來源。L-谷氨酰胺是一種不穩(wěn)定的氨基酸，隨著時間的推移，會轉(zhuǎn)換成細胞不能利用的形態(tài)，因此應(yīng)該在使用前添加到培養(yǎng)基中 。添加比原有培養(yǎng)基配方更多的L-谷氨酰胺的時候要特別小心，因為它的降解會導(dǎo)致氨的生成，氨會對某些細胞系有害。哺乳動物細胞培養(yǎng)基中的L-谷氨酰胺濃度可以從Medium 199中的0.68 mM到Dulbecco’s Modified Eagles的4 mM。無脊椎動物的細胞培養(yǎng)基可包含高達12.32 mM的L-谷氨酰胺。有些補充成分，如glutamax更穩(wěn)定，可在長時間培養(yǎng)生長緩慢的細胞時替代谷氨酰胺。
非必需氨基酸也可加入到培養(yǎng)基中，以替代那些在生長過程中已被耗盡的成分。培養(yǎng)基中補充非必需氨基酸能夠刺激生長，延長細胞的生存。
糖類
糖類形式的碳水化合物是能量的主要來源。大多數(shù)培養(yǎng)基包含葡萄糖和半乳糖，而有一些含有麥芽糖和果糖。
蛋白質(zhì)和多肽
最常用的蛋白質(zhì)和肽是白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和纖連蛋白，在無血清培養(yǎng)基中特別重要。血清是一種蛋白質(zhì)豐富的來源，包括白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、抑肽酶、胎球蛋白和纖維連接蛋白。白蛋白是血液中的主要蛋白，結(jié)合水，無機鹽，游離脂肪酸，激素和維生素，并將這些成分在組織和細胞間傳輸。白蛋白的結(jié)合能力使它成為從細胞培養(yǎng)基中去除有毒物質(zhì)有效途徑。
抑肽酶是細胞培養(yǎng)系統(tǒng)中的保護劑，在中性和酸性pH值環(huán)境下穩(wěn)定，耐高溫，耐蛋白水解酶降解。它對一些絲氨酸蛋白酶（如胰蛋白酶）有抑制能力。胎球蛋白是一種糖蛋白，胎兒和新生兒的血清中的濃度比成人血清中高。它也是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑。纖維連接蛋白是細胞附著的關(guān)鍵組分。轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種鐵轉(zhuǎn)運蛋白，能夠為細胞膜提供鐵離子。
脂肪酸和脂質(zhì)
同樣，它們在無血清培養(yǎng)基中是特別重要的，因為它們通常存在于血清中。
維生素
許多維生素是細胞生長和增殖必不可少的。細胞不能合成足夠數(shù)量的維生素，因此，是組織培養(yǎng)中重要的補充成分。血清同樣是細胞培養(yǎng)中維生素的主要來源，但是，培養(yǎng)基中也包含不同的豐富維生素，適用于某一特定細胞系的培養(yǎng)。維生素B群是生長刺激最常見的添加維生素。
微量元素
無血清培養(yǎng)基中通常會補充微量元素，來代替那些血清中的常見成分。微量元素，如銅、鋅、硒和三羧酸循環(huán)的中間產(chǎn)物，都是適當?shù)募毎L所必需的化學(xué)成分。這些微量營養(yǎng)元素是許多生物過程必需的，例如酶功能的維持。
培養(yǎng)基補充成分
某些細胞系推薦使用的完整生長培養(yǎng)基還需要額外的成分，它們在基礎(chǔ)培養(yǎng)基和血清中不存在。這些成分和補充物質(zhì)，有助于維持細胞增殖和細胞的正常代謝 。雖然一些補充成分如激素，生長因子和信號物質(zhì)是某些細胞系正常生長所需的，但最好還是要采取以下一些預(yù)防措施：
由于添加補充成分會改變完整生長培養(yǎng)基的滲透壓，這會對細胞生長產(chǎn)生不利影響，因此最好在添加補充成分后重新檢測一下滲透壓。對于大多數(shù)細胞系，最佳的滲透壓應(yīng)該介于260 mOSM/kg到320 mOSM/kg之間。
添加補充成分后培養(yǎng)基的保質(zhì)期會發(fā)生變化。含蛋白質(zhì)補充物的完整培養(yǎng)基降解速度往往比基本培養(yǎng)基快。
抗生素
雖然不是細胞生長必需的，抗生素通常還是會用來控制細菌和真菌污染物生長 。常規(guī)細胞培養(yǎng)不建議使用抗生素，因為抗生素可以掩蓋由支原體和耐藥細菌造成的污染 。此外，抗生素還會干擾敏感細胞的代謝。
培養(yǎng)基中的血清
血清是白蛋白、生長因子和生長抑制劑的復(fù)雜混合體 。血清是細胞培養(yǎng)基中最重要的組分之一，作為氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素（特別是脂溶性維生素，如A，D，E，和K）、碳水化合物、脂質(zhì)、激素、生長因子、礦物質(zhì)和微量元素的來源。通常會在培養(yǎng)基中使用胎兒和小牛來源的血清來支持細胞生長 [29] 。胎兒血清含有豐富的生長因子，適當細胞克隆和難以培養(yǎng)的細胞的生長 [30] 。胎兒血清被用于接觸抑制研究，因為它較低的生長促進特性。正常的生長培養(yǎng)基往往包含2-10％的胎兒血清。培養(yǎng)基中補充血清具有以下作用 [31] ：
1）血清未細胞提供了基本的營養(yǎng)成分（在溶液中和結(jié)合到蛋白質(zhì)上的）。
2）血清為生長促進和特定細胞功能提供多種生長因子和激素。
3）它提供了多種結(jié)合蛋白質(zhì)，如白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白，可以攜帶其他成分進入細胞。例如：白蛋白可攜帶脂類、維生素、激素等進入細胞。
4）它還可提供蛋白質(zhì)，如纖連蛋白，促進細胞附著到基質(zhì)上。它提供擴散因子幫助細胞在分裂前擴散。
5）它還提供蛋白酶抑制劑，保護細胞免受降解。
6）它還提供礦物質(zhì)，如Na+，K+，Zn2 +，F(xiàn)e2 +等。
7）它增加培養(yǎng)基的粘性，因此保護細胞在懸浮培養(yǎng)攪拌過程中免受機械損傷。
8)它還可以作為一種緩沖液。
聲明：本文章來源的稿件均為轉(zhuǎn)載，僅用于分享，如涉及版權(quán)等問題，請盡快聯(lián)系我們，我們第一時間更正，謝謝！
